К ПРОБЛЕМЕ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЁЗА: РАЗРАБОТКА СИСТЕМЫ ПРАЙМЕРОВ ДЛЯ МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ ПЦР
DOI:
https://doi.org/10.31082/1728-452X-2020-217-218-7-8-20-28Ключевые слова:
бруцеллез, бруцеллы, молекулярная диагностика, ПЦР, праймерАннотация
По данным ВОЗ, ежегодно регистрируется более 0,5 млн. случаев бруцеллёза среди населения 73 стран мира. По тенденции распространения бруцеллёза Казахстан относится к гиперэндемичным странам. Хотя бактериологический посев и остается «золотым стандартом» лабораторной диагностики, диагноз бруцеллёза подтверждается результатами посевов только в 15-24% случаев. Эффективность иммунологических методов диагностики снижается из-за недостаточной специфичности. Проблему решает внедрение генетического метода – ПЦР.
Цель исследования. Совершенствование системы лабораторной диагностики бруцеллёза, для детекции в мультиплексной ПЦР с целью идентификации микроорганизмов рода Brucella до видов.
Материал и методы. В работе использовали референтные и вакцинные штаммы бруцелл из коллекции музея живых культур ННЦООИ. В качестве основного метода использовался метод молекулярной диагностики – ПЦР.
Результаты и обсуждение. Получены три пары праймеров фланкирующие фрагменты в 428 (Br1), 329 (Br2) и 179 (Br3) нуклеотидных пар.
Выводы. Разработанная тест-система из набора праймеров Br1 + Br2 + Br3 на основе нуклеотидных последовательностей генов BCAN_B0369, BSPT1_II0384 и BruAb1_0072 дала возможность дифференциации штаммов до видов B. abortus, B. melitensis и B. suis, и экспериментальная серия препарата показала высокую специфичность.
Библиографические ссылки
Material iz Wikipedii – svobodnoi entciklopedii Brutcellez // Wikipedia, svobodnaya entciklopedia [Material from Wikipedia – the free encyclopedia of Brucellosis. Wikipedia]. Retrieved March 27, 2019. Available from: https://ru.wikipedia.org/wiki/Бруцеллёз#:~:text=A&text=Бруцеллёз%20(лат.,органов%20и%20систем%20организма%20человека.
Duissenova AK. Zoonotic infections: yesterday, today and tomorrow. In: Materily mezhdunarodnoi konferentcii “Zoonoznye infektcii: vchera, segodnya, zavtra” [Materials of the International conference “Zoonotic infections: yesterday, today and tomorrow”]. Almaty. 2011. P. 1-3
Kim AA, Kolmogorova EL, Rakhimbekova DK, Lukianchenko NG, Karataeva LS. Brucellosis – regional pathology of Kazakhstan. Mezhdunarodnyi zhurnal prikladnoi i fundamentalnoi issledovaniy = International journal of applied and fundamental research. 2013;5:162-164 (In Russ.)
Makarov VV, Grubyi VA, Gruzdev KN, Sukharev OI. Spisok MEB i transgranichnye infektcii zhivotnykh [The OIE-listed and cross-border infections in animals]. Vladimir: Monography; 2012. 162 p.
Syzdykov MS, Kuznetsov AN, Duisenova AK, Shevtsov AB. Phenotypic features and sensitivity to antibacterial drugs of clinical Brucella isolates isolated in Kazakhstan. Vestnik KazNMU = Bulletin of KazNMU. 2016;3:1-4 (In Russ.)
Ivanov AV, Salmakov KM, Iusupov RKh, Fomin AM, Chernov AN Brucellosis of animals and prospects for its specific prevention. Sektciya 8. «Biologicheskie i selskokhozyaistvennye nauki» = Section 8. “Biological and agricultural sciences”. 2011; P. 359-363
Sapargalieva AD. The doctrine of the pathogenesis and morphogenesis of brucellosis PP Ochkur in the light of the modern doctrine of inflammation. In: Materily mezhdunarodnoi konferentcii “Zoonoznye infektcii: vchera, segodnya, zavtra” [Materials of the International conference “Zoonotic infections: yesterday, today and tomorrow”]. Almaty; 2011. P. 16-19
Upravlenie mezhdunarodnoi bezopasnosti Borba s rasprostraneniem khimicheskogo i biologicheskogo oruzhiya // Internet resurs. Sootvetstvie Konventcii po zapreshcheniiu biologicheskogo oruzhiya stran-uchastnitc Avstraliyskoi gruppy [Department of international security, combating the proliferation of chemical and biological weapons. Online resource. Compliance with the Convention on the prohibition of biological weapons of the member countries of the Australian group]. Available from: www.australiagroup.net.
Syzdykov MS, Kuznetsov AN, Askarov AM, Erubaev TK. New approaches to stabilisation of the incidence of brucellosis in Kazakhstan with the use of information technology. In: Materialy Mezhdunarodnogo Evro-Aziatskogo kongressa po infektcionnym boleznyam [Materials of the international Euro-Asian Congress on infectious diseases]. Vitebsk; 2008. 68 p.
Kuznetsov AN, Syzdykov MS, Duissenova GN, Abuova FA, Berdalieva SF, Daulbaeva VP, Sadovskaya AK. Information support for epidemiological surveillance of brucellosis using GIS technologies. In: Materily mezhdunarodnoi konferentcii “Zoonoznye infektcii: vchera, segodnya, zavtra” [Materials of the International conference “Zoonotic infections: yesterday, today and tomorrow”]. Almaty; 2011. P. 3-12
Manin EA, Liamkin GI. Epizootological and epidemiological situation of brucellosis in the North Caucasus Federal district. In: Materialy regionalnoi nauch.-prakt. konf. s mezhdunarodnym uchastiem «Aktualnye voprosy obespecheniya sanitarno-epidemiologicheskogo blagopoluchiya v Prichernomorskom regione» [Materials of the regional scientific and practical conference with international participation “Topical issues of ensuring sanitary and epidemiological well-being in the black sea region”]. Stavropol; 2013. P. 53-55
Abdirassilova AA, Abdel ZZh, Kurmanov BK, Kassenova AK, Rysbekova AK, Yessimseit DT, Abdeliyev BZ, Meka-Mechenko TV, Dalibayev ZhS, Begimbayeva EZh, Development of a Real-time PCR using Fluorescent Hybridization Probes. J Res Med Dent Sci. 2020;8(1):26-36; eISSN No. 2347-2367: pISSN No. 2347-2545.
Kurcheva SA, Tiumentseva IS, Afanasev EN, Zharnikova IV, Startseva OL. Development of an enzyme-linked immunoassay system for detecting antibodies to the brucellosis pathogen and evaluating its diagnostic effectiveness. In: Materialy regionalnoi nauch.-prakt. konf. s mezhdunarodnym uchastiem «Aktualnye voprosy obespecheniya sanitarno-epidemiologicheskogo blagopoluchiya v Prichernomorskom regione» [Materials of the regional scientific and practical conference with international participation “Topical issues of ensuring sanitary and epidemiological well-being in the black sea region”]. Stavropol; 2013. P. 110-111
Xavier MN, Paixao TA, den Hartigh AB, et al. Pathogenesis of Brucella sp. The Open Veterinary Science Journal. 2010;4:109-118
Pankova EV. Feno-, genotipicheskaya izmenchivost brutcell i razrabotka ekspress metoda otcenki ikh immunogennosti [Phenotypic and genotypic variability of Brucella and development of a express method for assessing their immunogenicity]. Kazan: Abstract of dissertation; 2012. 198 p.
Vasileva NV, Polishchuk AG, Rudneva MV, Daks AA, Shurpitskaia OA, Zaitseva MM. PCR with electrospray ionization mass spectrometry in detection and identification of pathogenic microorganisms in hemocultures. Problemy meditcinskoi mikologii = Problems of medical Mycology. 2013; 15: 3: 35-41 (In Russ.)
Mikhailov LM, Kalinovskii AI, Barannikova NL, Shestopalov MYu, Andreevskaya NM, Mikhailova VA, Kuznetsov VI, Atlas AG, Balakhonov SV. Features of laboratory diagnostics of experimental brucellosis caused by S-and L-forms of the infectious agent. Byulleten = Bulletin. 2012;2(84):1:131-134 (In Russ.)
